En la prestigiosa revista Journal of Fungi se publicaron los resultados de un estudio del Instituto de Medicina Regional de la UNNE que posibilitó el desarrollo y evaluación preliminar de un ensayo molecular para el diagnóstico de la Paracoccidioidomicosis, a partir de muestras clínicas y de aplicación en el lugar de atención. «Es un desarrollo biotecnológico médico de alcance internacional, para fortalecer el diagnóstico de esta micosis en las regiones endémicas no solo de Argentina sino de toda Latinoamérica», destacan desde el IMR-UNNE.
La paracoccidioidomicosis (PCM) es una enfermedad fúngica sistémica endémica, considerada una de las micosis profundas más importantes de Latinoamérica, debido a su amplia distribución geográfica, su naturaleza crónica y su potencial para causar enfermedad grave y mortal cuando el diagnóstico y el tratamiento se retrasan.
Justamente, el diagnóstico suele demorarse debido a la limitada disponibilidad de herramientas accesibles y rápidas en entornos endémicos, particularmente en áreas rurales o con recursos limitados y acceso restringido a laboratorios especializados.
Reconociendo la creciente importancia de las enfermedades fúngicas en el contexto internacional, la Organización Mundial de la Salud incluyó en el año 2022 a Paracoccidioides en su lista de patógenos fúngicos prioritarios, lo que subraya la necesidad de fortalecer la investigación, la vigilancia y la capacidad de diagnóstico.
En el Instituto de Medicina Regional de la UNNE hace varios años, y en vínculo con instituciones del país y el extranjero, se vienen desarrollando distintas líneas de abordaje sobre esta enfermedad, desde estudios epidemiológicos para caracterizar y visibilizar la incidencia de esta micosis, así como en la búsqueda de técnicas de diagnóstico más precisas y accesibles.
Fruto del esfuerzo y la preocupación del IMR-UNNE por aportar al conocimiento y tratamiento de esta enfermedad desatendida, de manera reciente se publicó en la revista «Journal of Fungi» un nuevo desarrollo que podría ayudar a revertir la brecha en el diagnóstico de esta micosis.
Se trata de un nuevo ensayo molecular para el diagnóstico en el punto de atención de la PCM, a partir de muestras clínicas mediante amplificación por recombinasa polimerasa acoplada a un ensayo de flujo lateral.
El equipo a cargo del desarrollo estuvo integrado por el Dr. Javier Mussin, el Lic. Luis Corredor Sanguña, la Dra. Florencia Rojas y el Dr. Gustavo Giusiano, investigadores del Instituto de Medicina Regional de la UNNE y el CONICET, y el Dr. Diego Comerci, del Instituto de Investigaciones Biotecnológicas (IIBIO, CONICET-UNSAM).
«Las características operativas del ensayo, incluyendo su corto tiempo de respuesta, los requisitos de amplificación a baja temperatura y la lectura visual sencilla, respaldan su potencial aplicabilidad como estrategia de diagnóstico en el punto de atención o cerca del paciente», se destaca en el artículo de Journal of Fungi, una publicación Q1, de alto factor de impacto, de referencia en el área de la micología médica a nivel internacional.
Satisfacción
En diálogo con UNNE Medios, los doctores Mussin y Giusiano destacaron el logro alcanzado y señalaron que la publicación ya despertó interés desde distintos países ya que, en toda Latinoamérica, donde prevalece esta enfermedad, no existe un sistema diagnóstico similar.
Consideraron que representa un desarrollo biotecnológico médico ejemplo de «investigación traslacional», es decir, cuando se conecta la ciencia básica con estudios preclínicos y clínicos y las problemáticas en salud pública con el objetivo de trasladar los descubrimientos de laboratorio a las necesidades de los pacientes.
«Fue un objetivo que hace años nos planteamos y que pudimos lograr desde el IMR, abordando esta enfermedad en territorio y desde el laboratorio», remarcaron.
Situación de la PCM
El diagnóstico de laboratorio de la PCM aún se basa principalmente en métodos micológicos convencionales, incluyendo el examen microscópico directo, la obtención del hongo por cultivo y la serología, aunque todas con grandes limitaciones en la precisión y sensibilidad de resultados, la calidad y el acceso a muestras clínicas, y la experticia del operador, entre otros factores.
Ante ello, en las últimas dos décadas, los enfoques moleculares han surgido como alternativas prometedoras para el diagnóstico de esta micosis, como ensayos de PCR convencional, PCR anidada y PCR en tiempo real, que han demostrado una alta sensibilidad y especificidad analítica para la detección de ADN de Paracoccidioides.
Sin embargo, a pesar de su rendimiento analítico, los ensayos basados en PCR no se han incorporado a los flujos de trabajo de diagnóstico rutinario en muchas áreas endémicas, debido a requerimientos de equipamiento específico, condiciones de laboratorio controladas, personal altamente capacitado, y otros requisitos que terminan representando barreras importantes para los centros de salud periféricos o de baja complejidad.
En este contexto, las tecnologías conocidas como de «amplificación isotérmica de ácidos nucleicos» han cobrado mayor relevancia como alternativa práctica a la PCR para el diagnóstico de enfermedades infecciosas en entornos con recursos limitados.
A diferencia de la PCR, estos métodos amplifican los ácidos nucleicos a temperatura constante, reduciendo así la complejidad de los instrumentos y acortando el tiempo de respuesta de los ensayos.
Entre ellos, la amplificación por polimerasa recombinasa (RPA) resulta especialmente atractiva para aplicaciones en el punto de atención, ya que opera de manera eficiente a temperaturas relativamente bajas, generalmente entre 37 y 42 °C, y puede generar productos detectables en poco tiempo.
Además, al combinar la RPA con un ensayo de flujo lateral (LFA), los productos de amplificación pueden visualizarse en una tira inmunocromatográfica mediante una lectura de fácil interpretación.
En esa línea, el desarrollo del IMR-UNNE, al combinar la amplificación isotérmica con la detección por flujo lateral, reduce la dependencia de equipos de laboratorio complejos y ofrece una alternativa práctica y de bajo costo a los métodos basados en PCR, especialmente en entornos con infraestructura limitada.
El tiempo total del ensayo lleva aproximadamente 35 minutos, incluyendo 20 minutos de amplificación a 39 °C y 15 minutos para la migración por flujo lateral y la interpretación visual, tiempo de respuesta considerado adecuado para escenarios de diagnóstico cerca del paciente.
Se resalta que el uso de una lectura LFA simplifica la interpretación de los resultados al convertir el evento de amplificación molecular en una señal visible. Un resultado positivo se define por la aparición simultánea de las líneas de prueba y control, mientras que un resultado negativo muestra solo la línea de control.
«Fue un objetivo que hace años nos planteamos y que pudimos lograr desde el IMR, abordando esta enfermedad en territorio y desde el laboratorio»
Relevancia del método
«El ensayo RPA-LFA desarrollado en este estudio representa una estrategia molecular prometedora, rápida, específica de género y visualmente interpretable para la detección de ADN de Paracoccidioides spp. extraído de muestras clínicas», se indicó en la revista «Journal of Fungi».
Estas características son particularmente relevantes en regiones endémicas donde el acceso a laboratorios de micología especializados es limitado y los retrasos en el diagnóstico generan secuelas invalidantes e incapacitantes en las formas crónicas y alta mortalidad en los jóvenes y niños.
En este contexto, el nuevo sistema diagnóstico desarrollado podría contribuir a una confirmación de laboratorio más temprana, una toma de decisiones clínicas más oportuna y una mejor vigilancia epidemiológica de la PCM.
Perspectivas
El presente estudio debe interpretarse como una prueba de concepto que requiere una validación adicional con cohortes clínicas más amplias y diversas para establecer estimaciones sólidas de la sensibilidad, la especificidad y los valores predictivos del diagnóstico.
“Para ello ya estamos elaborando un sistema de validación inter-laboratorios a nivel Latinoamérica”, indicaron.
Desde el Instituto de Medicina Regional (IMR-UNNE) recordaron que el nuevo ensayo se apoyó en desarrollos previos del instituto, que representaron avances pioneros para la detección de esta micosis.
En este sentido, resaltaron que el ensayo actual representa un paso hacia un flujo de trabajo de diagnóstico molecular más implementable en el campo.
«Estamos orgullosos de contribuir con un desarrollo tecnológico, con potencial transferencia, que intenta cubrir una necesidad regional para el diagnóstico de una enfermedad desatendida como la Paracoccidioidomicosis», concluyeron.
